INNEHÅLL AV ARTEMIZININ I ARTEMISIEN ANNUA L EXTRACTER SOM SKAFFAS AV ANDRA METODER Soktoeva, G.L. Ryzhov, K.A. Dychko, V.V. Khasanov, SV Zhshzhitzhapova, LD Padnaeed Buryat State University, st. Smolin, 24a, Ulan-Ude (Ryssland) Tomsk State University, 36, Lenina Ave., Tomsk (Ryssland) Baikal Institut för Naturförvaltning, Sibirisk Gren av Ryska Akademin för Vetenskap, ul. Sakhyanova, 8, Ulan-Ude (Ryssland)
Frågor om isolering av artemisinin från Artemisia annua L. och dess kvantitativa bestämning med användning av HPLC-MS-metoden beaktas. Artemisinin isolerades genom olika extraktionsmetoder: maceration, ultraljud och subkritisk CO2-extraktion. Kompositionskompositionen av CO2 och hexanoxtrakt studerades av GC-MS.
introduktion
Artemisinin (1) är en peroxidsesquiterpen [1], som är ett högeffektivt antimalariellt läkemedel och en prekursor av mer potenta föreningar, såsom artemeter, artesunate och några andra. Betydelsen av artemisinin och dess derivat baseras på den mycket snabba verkan av en förening av denna typ mot dess huvudsakliga patogen Plazmodium falciparum, vilket också orsakar hjärnsjukdom. Den kemiska och biokemiska syntesen av artemisinin har visat sig vara väldigt dyr och är därför otillgänglig som huvudkälla för artemisininproduktion [2].
Malaria orsakas av en mikroorganisma - Plasmodium malaria. Det finns 4 typer av sådant plasmodium, parasitiskt i människokroppen: Plazmodium vivax, P. ovale, P. malariae och P. falciparum. I mitten av XX-talet, tack vare den utbredda användningen av kinin och dess derivat, var det möjligt att avsevärt minska antalet patienter med malaria. Men sedan 60-talet. Malaria på förra seklet påminns igen om sig själv. Detta berodde på att malaria Plasmodium (P. falciparum), i Thailand och Sydamerika, resistent mot kinin, klorokin, mefloquin och andra kinolinbaserade läkemedel uppträdde och spred sig i andra regioner [3, 4]. Problemet med att hitta nya effektiva antimalariala läkemedel, bland vilka artemisinin föreslogs, har blivit aktuellt. Denna unika förening upptäcktes i Kina (det kinesiska namnet är qinghaosu). Verken startades 1967 och kallades "Program 523" [5]. Den är isolerad från malmen av den årliga Atemisia annua L., som distribueras inom den tidigare Sovjetunionen, som täcker områden av Altai, Transbaikalia, Amur-regionen, Kazakstan, Kirgizistan, Uzbekistan och Turkmenistan. Malurt är allmänt representerat i Kina och andra länder [6]. Den totala mängden artemisinin isolerad från olika delar av A. annua är ca 0,01 och 1,4% av torrbladsmassan [2].
Artemisia annua L. är det huvudsakliga råmaterialet för artemisininproduktion. Världshälsoorganisationen 2001 rekommenderade användningen av artemisinin vid förstahandsbehandling för malariakontroll, vilket ledde till en ökning i området under ettårigt malurt. Huvudsakligen odlas malurt årligen i östra Asien, främst i Kina och Vietnam (70% av areal från världens lager), som nyligen introducerades i kultur i östra och södra Afrika (20% av världens lager), vilket ger en fjärdedel av globala hälsobehov [7].
Förutom artemisinin värderas A. annua för dess eteriska olja, som har en karakteristisk söt, gräsmattig arom och används i parfymer och kosmetiska produkter. Dessutom har oljan antibakteriella egenskaper och kan användas för att behandla hudsjukdomar. Förutom sesquiterpen-laktoner, som har det huvudsakliga terapeutiska värdet, innehåller de eteriska oljorna i denna växt en signifikant mängd komponenter som har värde, såsom 1,8-cineoleum, artemisiaalkohol och keton, borneol och andra. analyserade också den fysiologiska effekten av lipofila extrakt på huden [2].
I samband med den rika och mångsidiga sammansättningen av biologiskt aktiva substanser som finns i Artemisia annua är sökandet efter nya tillväxtområden av årlig malurt av stort intresse. I republiken Buryatia växer 46 arter av polynum [8], inklusive Artemisia annua L. Innehållet i artemisinin i Polen, ettårigt, växer i Buryatia, har inte studerats tidigare. Syftet med detta arbete var därför den kvantitativa bestämningen av artemisinin i extrakt erhållna genom olika extraktionsmetoder.
Experimentell del
Råmaterialet för studien valdes ut över marken i den polska årliga Artemisia annua L., som samlades under det första decenniet av augusti 2010, i blomningsfasen.
Isolering av artemisinin och andra biologiskt aktiva substanser (eterisk olja) utfördes med användning av olika extraktionsmetoder: maceration, ultraljuds extraktion och subkritisk CO2-extraktion. Extraktionen utfördes på laboratorieanläggningar. Hexan, etylacetat, etanol och CO2 användes som extraktionsmedel. Data- och extraktionsparametrarna visas i tabell 1. Extrakt från fällningen separerades genom centrifugering i en OP-8UHL4.2-centrifug vid 5000 rpm och filtrerades därefter genom ett provfiltreringssystem.
Artemisininkvantitering bestämdes av HPLC-MS med användning av en Finnigan Surveyor högprestandad vätskekromatograf utrustad med en autosampler Plus autosampler och en LC Pump Plus-pump med en Finnian-detektor, LCn Advantage MAX (jonfälla) joniseringsmetod - elektrospray. Kolumn "Hypersyl Gold" 150 × 4 mm, fylld med silikagel-sorbent med C18-graftfaser (partikelstorlek 5 μm), (tillverkad av Thermo Electronic Corporation, USA). Eluering utfördes i isokratiskt läge (50% (A): 50% (B)), utgångsbuffertens (A) komposition var en vattenhaltig lösning av myrsyra, (pH = 3) + 2 ml av en mättad lösning av ammoniumacetat, elueringsbuffert (B) 100% acetonitril. Den volymetriska flödeshastigheten för elueringsmedel är 0,5 ml / min, volymen av det injicerade provet (autosampler) är 25 pl. Ionregistrering utfördes i övervakningsläget för positivt laddade joner (vald ikonövervakning, SIM) med en molekylvikt av 300 (på grund av tillsatsen av ammoniumjon NH4 till artemisininmolekylen) med en fönsterbredd (299-301) m / z. Kvantitativ bestämning utfördes med användning av den interna standardmetoden med användning av det statliga standardprovet från Sigma.
Extraktionsmetoder och parametrar
Nr. P / p Extraktionsmetod Extraktant Extraktionstid / extraktionsparametrar Artemisininhalt i%, i termer av a.s.s.
1 Maceration av etanol 24 h / råmaterial: lösningsmedelsförhållande (1: 5) 0,040 ± 0,002
2 Maceration etanol 48 h / råmaterial: lösningsmedelsförhållande (1: 5) 0,038 ± 0,002
3 Maceration av hexan 24 h / förhållande prov: lösningsmedel (1: 5) 0,039 ± 0,002
4 Ultraljuds extraktion etanol 15 min / förhållande råmaterial: lösningsmedel (1: 5), ljudfrekvens 50 Hz, T = 25 ° C 0,039 ± 0,002
5 Ultraljuds extraktion etylacetat 15 min / råmaterial: lösningsmedelsförhållande (1: 5), ljudfrekvens 50 Hz, T = 25 ° C 0,022 ± 0,001
6 CO2-extraktion so2 24 h / flödeshastighet 30 1 / h, T = 20-22 ° C, P = 6,0-6,2 MPa 0,054 ± 0,003
Dessutom undersöktes de flyktiga komponenterna av CO2- och hexanekstrakter genom kromatografi-masspektrometri på en Agilent Packard HP 6890-gaskromatograf med en MSD 5973N fyrhjulsdetektor. Vi använde en 30-meters kvarts kolumn TR-5 ms med en inre diameter av d = 0,25 mm, en filmtjocklek på 0,25 μm. Kromatografisk separation utfördes såsom beskrivits i [9]. Kvalitativt bestämdes komponenterna i extrakten genom att jämföra de fullständiga masspektra med data från biblioteket med kromatografiska masspektrometriska data för flyktiga ämnen av vegetabiliskt ursprung A.V. Tkachev, bibliotek NIST 08 och Wiley 275. Resultaten av analysen presenteras i tabell 2.
Huvudkomponenterna i koldioxid och hexan extrakt
Toppområde Relativ Anslutningar Toppområde relativt
Föreningar av koldioxid-extrakt hexan extrakt
Koldioxid extrakt hexan extrakt
Monoterpenoider långkedjiga kolväten
Tricykylen 140181 - Tricosan 103969 52288
a-pinen 1155320 - Tricozen-1 1956324 -
Camphene 2021028 - n-Pentacosane 534763 110485
R-pinen 371548 1683858 645634 - - -
n-heptakosan 279800 132358
3-karen
Cykliska kolväten
limonen
Pentacyclo 576196 -
R-phellandren 587143 - [7,5,0,0 (2,8).0 (5,14) 0.
1,8-cineol 133599- (7,11)] tetradekan
Artemisia keton 1413437 - 1,8-dimetylfenantren 3765681 1080289
Borneol 170158 707945 - - Flyuoren 3507465 319501
Bornylacetat
diterpenoider
seskviterpenoider
Metyl-3,5-bis (etylamino) bensoat 627581 283913
Cariofillen 370714 214560 - -
Karyofillenoxid
Germacren D 214913 -
R-selinene 3053333 328535
a-kadinol 149485 -
Diskussion av resultaten
Som framgår av de data som presenteras i tabell 1 var det lägsta utbytet av artemisinin (0,022%) med ultraljuds extraktion med etylacetat. Innehållet av artemisinin i extrakt isolerade genom ultraljudsextraktion och macerering med användning av olika lösningsmedel (hexan, etylalkohol) är inte signifikant olika 0,038-0,040% i termer av A. p. När man insisterar på malmgräsmjöl årligen i 24 och 48 timmar är innehållet av artemisinin i de erhållna extrakten approximativt detsamma som 0,040 respektive 0,038%. Det högsta utbytet av artemisinin (0,054%) erhölls under den förkritiska CO2-extraktionen. Som jämförelse presenterar vi några data om innehållet av artemisinin, i ettårig malurt, som växer i olika områden. Artemisia annua L., som växer i olika delar av Kina, innehåller från 0,01 till 0,22% artemisinin. Några hybrider av årlig malurt som odlas i Kina och Vietnam innehåller från 1,0-1,5% artemisinin [10]. Innehållet av artemisinin i A. annua, som växer på den tidigare Sovjetunionens territorium, är följande (värden anges i lufttorka råvaror): Georgiens SSR (0,005%), Kirgizistan SSR (0,025%), Moldavas SSR (0,01-0,02%), Krasnodar-territoriet (0,04%), ukrainska SSR (0,005-0,05%), Turkmenistan (0,05% i termer av a.s.c.), Kazakstan (0,01-0,05% i termer av A.S.S.) [11].
I studien av kompositionen av extrakt av Artemisia annua CO2 som härrör från extraktion och maceration när det används som extraktionsmedel hexaner genom gaskromatografi-masspektrometri fann signifikanta skillnader i sammansättningen av extrakten. Monoterpenoider, sesquiterpenoider, långkedjiga kolväten, cykliska kolväten och diterpenoider detekteras med metoden för masspektrometri.
Monoterpenoider finns endast i CO2-extraktet. Huvudkomponenterna i CO2-extraktet är a-pinen, 3-karen, artemisiaketon, (3-selen, tricozen-1, 1,8-dimetylfenantren och fluoren.
Hexanextraktet Artemisia annua genom gaskromatografi-masspektrometri identifierade huvudsakligen långkedjiga kolväten och cykliska kolväten detekterades från seskviterpenoider 3 Selin.
Förutom artemisinin, som representerar värdet av det basiska läkemedlet, innehåller eterisk olja en stor mängd av komponenter som har ett biologiskt värde, såsom artemisia keton, 1,8-cineol, borneol och andra.
rön
1. Innehållet av artemisinin i olika extrakt av A. annua (luftdel, blomningsfas) som växer på republiken Buryatias territorium bestämdes av HPLC-MS.
2. Det maximala artemisinininnehållet finns i CO2-extraktet (0,054% i termer av a.s.c.)
3. Med hjälp av kromatografismasspektrometri studerades kompositionen av essentiell olja extraherad genom olika extraktionsmetoder.
Artemisia annua L.
Taxon beskrivning
Ryska namn
taxonomi
bild
Växter på kartan
Botanisk beskrivning
Artemisia Annua L. Sp. pl. (1753) 847; Bess. i Nouv. Mem. Soc. Nat. MOSC. III, 81; Dc. Prodr. VI, 119; LDB. Fl. Ross. II, 592; Boiss. Fl. eller. III, 371; Maxim. i tjur. Acad. Sc. Petersb. Viii, 528; Hook. Fl. Br. Ind. III, 323; Com. i fl. Manchu. III, 659; Nakai, Fl. Koreanska. II, 30; Fedch. Adyge. sol. Turk. IV, 200; Rydb. North Am. Fl. 34, del 3, 259; Pampan. i Nuov. Giorn. Bot. Ital. n.s. XXXIV, 637; Hall och Clem. Artem (1923) 102; Com. och alice. Res. sol. Fjärran Östern kr. II, 1036; Krasheniny. i fl. sydöst. Europ. Del USSR, VI, 357; Grossg. Fl. Kavko. IV, 138; Krasheniny. och vingar. Fl. Zap. Sib. XI, 2816; Polyak. i Mayevsky, FL. 586. - A. chamomila Winkl. i Tr. Petersburg University. bot. Trädgård, X, 87; Fedch. op. Op. - Ic.: Amm. Stirp. rar. t. 193, f. 23; Gmel. Fl. sib. II-fliken. 25. - Exs.: ГРФ № 3152. - Ettårigt malurt.
Annual. Doftande växt, grön, nakna eller dispergerade, små, omgivande hår, rak, ribbad, eller brunaktig violett-brunaktig stammen 30-100 cm hög.; löv är prickade-fossa-ferruginösa, lägre petiolat, 3-5 cm lång. och 2-4 cm bred., oval, trefaldig pinnacular, segment av den sista ordningen i längdled, kortspetsiga; hela eller 1-2 tänder, 1-2 mm långa. och 0,5 mm bred; medium och stammen lämnar två gånger peristorasschonnye, övre oskaftade, mindre och mindre komplexa, de översta högblad enkla eller med ett litet antal sidolober. Korgar sfäriska, 2-2,5 mm breda., Numerous Rejected eller hängande, på korta ben, connivent på korta grenar, i b. m. lång, pyramidal panikelblomställning omslaget slät yttre bladen linjärt långsträckta, grön, inre oval eller nästan rund längs kanten allmänt plonchato gränsade glänsande; behållare utbulning, bar; honblommor kant, inklusive 10-20, corolla filiform dot glandulära, blad snävt linjära stigmas, trubbig, visning av ett rör; skivblommor är bisexuella, 12-30 i antal, smalformade rörformiga, nakna; anthers snävt linjära, övre appendage långsträckta, akutvinklade, basala lober mycket korta, spetsiga; kolonnen är kortare än ståndarna, stigmatiseringen av stigma är linjär, rak, något avvikande, cili vid toppunktet; achenes 0,8-0,6 mm., avlång, ovala, platta, i toppen med ett litet cirkulärt område, kantad av kanten knappast. Col. VIII - IX.
På weedy platser nära bostäder, trädgårdar, i trädgårdar. - Europa. h.: Övre Dniester., Övre Dnieper., Volzh. Don., Volga., Lower. Don., Black., Bess., Krim; Kaukasus: Zap.- och East. Trans., Tal., Ons. Asien: Aral-Caspian, Pribalh, Dzh.-Tarbes, Tien-Shan, Syr-Dar, Pam.-Al. Amu-Dar, Horn....... Turkmen. Tot. var.: ons Heb., Srediz., Balk. -Maloaz., Arm.-Kurd., Iran, J.-Kashg., Kit., Jap., Mongoliet, North. Amerika (främling).
Typen av vy är ritningarna av Amman och Gmelin.
Hushåll. VAL. Utbytet av eterisk olja är 0,1-0,64% (enligt Goryaev). Enligt Joshikazu Imade (1937) är cineol och substans C10H6O i oljan; detta ämne har studerats i detalj av Ashania och Joshitomi (1917); tillsammans med artemacyaketon, fann isomeren, isoartemisieaceton, sin isomer, i olja. Denna keton kunde isolera från moderluten som kvarstod vid framställning av artemacyaceton-semikarboson. Seisi Takagi (1928), samtidigt som man fortsätter att studera japanska A. annua, de kända olja 4-komponenter lagt till en annan två nya: kadinen och karyofyllen. Baserat på studier Rutovskogo och Vinogradov (1929), olja sammansatt av α-pinen, cineol, kamfen, och artemiziaketona izoartemiziaketona, en liten mängd av Borneol, ättiksyra och smörsyra, kimunovogo aldehyd (förmodligen semikarbozon) och fenol (förmodligen eugenol). De underjordiska delarna av en liten mängd av alkaloider funnet (Lazurevsky, Sadykov, 1939; massage, 1947). Enligt observationer i fältet (Yunatov, 1954), i grönstaten, är inte ätit av boskap. Närvaron av alkaloider bekräftas av M.I. Goryaeva, G.K. Kruglykhina, E.I. Satdarova (1959).
Sammanfattning och avhandling om medicin (04/14/02) om ämnet: Farmakognostisk studie av Artemisia annua L. och Artemisia sieversiana Willd. Buryatias flora
Sammanfattning av avhandling i medicin om ämnet Farmakognostisk studie av Artemisia annua L. och Artemisia sieversiana Willd. Buryatias flora
Som ett manuskript
Soktoeva Tuyana Erdemovna
FARMAKOGNOSTISK FORSKNING ARTEMISIA ANNUA L. OCH ARTEMISIA SIEVERSIANA WILLD. FLYORER AV BURYATIEN
04/14/02 - farmaceutisk kemi, farmakognosi
Sammanfattning av avhandling för graden av kandidat för farmaceutiska vetenskaper
Avhandlingen är gjord i VPO "Buryat State University" av ministeriet för utbildning och vetenskap i Ryssland och den ryska vetenskapsakademin Institute of Baikal Nature Management, Siberian Branch Russian Academy of Sciences
Handledare: Doktor i kemisk vetenskap, professor
Radnaeva Larisa Dorzhievna
Officiella motståndare: Doktor i biovetenskap, professor
Antsupova Tatyana Petrovna
Kandidat av farmaceutiska vetenskaper Mongolov Hanhai Purbuevich
Ledande organisation: Perm State
Ryska federationens hälsovårdsministerium
Försvarsmötet kommer att äga rum den 23 december 2011 kl 10.00 vid mötet i avhandlingsrådet DM 003.028.02 vid SB RAS: s institut för allmän och experimentell biologi på adressen: 6, Sakhyanova St., Ulan-Ude, 670047.
Avhandlingen finns tillgänglig på Central Scientific Library i Buryat Scientific Center i SB RAS.
Sammanfattning publicerad den 22 november 2011.
Vetenskaplig sekreterare vid avhandlingsrådet kandidat till biologiska vetenskaper
ALLMÄN BESKRIVNING AV ARBETET Relevans av ämnet. Växter släktet Artemisia (Artemisia) -perspektivnye källor till biologiskt aktiva substanser, sådana arter såsom dragon Artemisia dracunculus L., malört malört L., Artemisia vulgaris Artemisia vulgaris L. ofta används i traditionella, holistic medicin och livsmedelsindustrin. Artemisia annua Artemisia annua L. framgångsrikt införts i kulturen i många länder, och år 2001 blev rekommenderad av WHO som den främsta källan till artemisinin - första linjens behandling agent för malaria. Idag ger länder som producerar artemisinin cirka en fjärdedel av de globala hälsobehoven (Tolstikova, 2010, Xiao Wang, 2011). Av n. Årlig 137 allokeras biologiskt aktiva föreningar, inklusive 40 seskviterpener, 10 terpener 7 kumariner, flavonoider 46 som kan tjäna som grund för läkemedelsutveckling (Bhakuni, 2001). I 80-talet av XX-talet, en grupp forskare (Schroeter, 1989) gjordes försök att kulturen vild n. De årliga flora VILR USSR (Moskva). Nuförtiden utförs stora arbeten med introduktionen av första året på Tomsk State University. I Buryatia n. Annual är en vildväxande art.
Tillsammans med den årliga parasiten i Buryatia är Sivers malört Artemisia sieversiana Willd. Utbredd, vilket också är en lovande art. Gräset i Seabera innehåller flavonoider, eterisk olja, kumariner (Tkachev, 2002; Shatar, 1998; Hanina, 1999; Suleimenov, 2009).. Eterisk olja av krav Sievers är av intresse som en källa för chamazulene - en icke-toxisk förening som har en anti-inflammatorisk, antibakteriella, regenerativ verkan (Berezovskaja, 1991; Hanin, 1992).
Hittills har en detaljerad kemisk studie av Sivers malurt och malurt av den årliga floran Buryatia inte utförts som lovande källor till biologiskt aktiva substanser, därför är deras undersökning en brådskande uppgift.
Mål: Farmakognostisk studie av Sivers malurt Artemisia sieversiana Willd. och malurt årliga Artemisia annua L. som värdefulla källor till biologiskt aktiva substanser.
För att uppnå detta mål är det nödvändigt att lösa följande uppgifter:
1. Att identifiera de anatomiska och diagnostiska tecknen på antenndelen av Sivers och P. ettårig för att etablera merchandisingindikatorer
råvaror, bedöma reserverna och möjligheten att skörda p. ett år och p. Siversa på Republiken Buryatias territorium;
2. Att studera den kemiska sammansättningen av huvudgrupperna av biologiskt aktiva substanser i dessa växter och bestämma deras kvantitativa innehåll, fastställa lokalisering av eteriska oljor och artemisinin i enskilda delar av växter, studera dynamiken i deras ackumulering i utvecklingsfaserna och bestämma de optimala uppsamlingsbetingelserna.
3. Att utveckla en metod för kvantitativ bestämning av artemisinin i den enåriges antenndel;
4. Bestäm kvalitetsindikatorerna och standarderna för innehållet av grundläggande biologiskt aktiva substanser, för att utveckla regelbunden dokumentation för läkemedelsråvaror - gräset av malmgräs och gräset av ettårig malurt.
Vetenskaplig nyhet. De viktigaste diagnostiska egenskaperna hos gräset i Sivers och P. årliga upprättades, de numeriska indikatorerna som behövs för standardisering av råvaror utvecklades.
En undersökning gjordes av den kemiska sammansättningen av Sivers gräs och av ettårigt gräs. Innehållet i eteriska oljor, flavonoider, fettsyror, makro- och mikroelementer bestämdes. Flavonoider - luteolin-7-glukosid, rutin, quercetin och chryoeriol detekterades med HPLC-MS-metoden i dessa växter. De viktigaste fettsyrorna i de studerade typerna av malurt är palmitinsyra, linolsyra, linolensyra, 10% oktadekensyra finns också i betydande malurt.
Villkoren för extraktion av artemisinin (typ av extraktionsmedel, extraktionsmetod, extraktionstid) från den årliga örten bestämdes och det fastställdes att maximal extraktion av artemisinin uppnås genom ultraljud och subkritisk CO2-extraktion. Med HPLC-MS har det fastställts att den största mängden artemisinin hos ettåringen finns i blomningsfasen i blomställningarna.
Studierad dynamiken av ackumulering av eterisk olja, beroende på utvecklingsfasen och delen av växten. Den största mängden chamazulene eterisk olja s. Siversa ackumuleras i faser av spirande och blommande i blomställningar.
De etablerade kvalitetsindikatorerna för BAS ingår i regleringsdokumenten.
Praktisk betydelse. Reserven och möjlig årlig upphandling av en avveckling av Sivers och en avveckling av ett år på Republiken Buryatiens territorium (avveckling av Sivers - från 0,1 till 73,7 ton per år och en avveckling på ett år - från 1,2 till 122,3 ton per år).
En teknik har utvecklats för kvantitativ bestämning av artemisinin i p. Gräs med en årlig HPLC-MS-metod. Villkoren för provberedning av råmaterial för analys för kvantitativ bestämning av artemisinin är vetenskapligt underbyggda.
Standardiseringen av råvaror har genomförts, FS-projekt har utvecklats - "Siver Wormwood Herbal" och "Wormwood One-Year Grass".
Graden av genomförande. Metoden för att extrahera information om essentiell olja och mikroskopisk analys testades och infördes i utbildningsförfarandet vid läkemedelsdepartementet vid Federal State Budget Educational Institution of Higher Professional Education "Buryat State University" (genomförande lag nr 1 av den 6 september 2011). Projekt av FS på gräs av Sivers malurt och ettårig malurt är beredda för övervägande.
Till försvaret tas ut:
• resultaten av studien av den anatomiska strukturen, bestånden, äkthetskriterierna för Sivers och P., växande i Buryatia;
• Resultat av en kemisk studie av biologiskt aktiva ämnen och deras säsongsdynamik i ackumulering.
• Resultat av studier om standardisering av ovanstående del av Sivers p. Och s. Ett år.
Anslutning av arbete. Huvudbestämmelserna i avhandlingen presenterades och diskuterades vid: en vetenskaplig-praktisk konferens med internationellt deltagande "Utveckling av traditionell medicin i Ryssland: Erfarenhet, forskning, utsikter" (Ulan-Ude, 2010); 7: e vintersimposium om kemometri "moderna metoder för dataanalys" (Sankt Petersburg, 2010); den internationella vetenskapliga konferensen tillägnad 15-årsdagen av Buryat State University "Faktiska studier av Baikal Asien" (Ulan-Ude, 2010); V internationell vetenskaplig-praktisk konferens "Prioriteringar och egenskaper vid utvecklingen av Baikal-regionen" (Ulan-Ude, 2011); X internationell vetenskaplig-praktisk konferens "Problem med botanik i södra Sibirien och Mongoliet" (Barnaul, 2011); IV All-Russian Conference "Nya framsteg inom kemi och kemisk teknik för växtmaterial" (Barnaul, 2009); XVI International Conference of Students, Postgraduate och Young Scientists "Lomonosov-2009" (Moskva, 2009); XV Internationella ekologiska studentkonferensen "Ekologi i Ryssland och angränsande territorier" (Novosibirsk, 2010); II All-Russian vetenskaplig-praktisk konferens av studenter, doktorander och unga forskare "Teknik och utrustning för kemisk, bioteknologisk och livsmedelsindustrin" (Biysk, 2009); All-Russian vetenskaplig-praktisk konferens "Vegetation
Baikal-regionen och intilliggande territorier "(Ulan-Ude, 2011); V skolseminarium för unga forskare i Ryssland "Problem med hållbar utveckling av regionen" (Ulan-Ude, 2009); den regionala ungdomsvetenskapliga-praktiska konferensen med internationellt deltagande "Miljövänlig och resursbesparande teknik och material" (Ulan-Ude, 2010).
Arbetet utfördes som en del av forskningsprojekten: RFBR: 08-04-90202-Mong_a "Studie av biogenetiska mönster av biosyntes av biologiska aktiva föreningar av endemiska växter i Centralasien" (2008-2009), 08-04-98037-r_sibir_a "Kemisk sammansättning av växter som indikator tillståndet för ekosystemen i Baikal-regionen "(2008-20 Yugg); tvärvetenskapligt integrationsprojekt nr 93 "Utveckling av forskning inom medicinsk kemi och farmakologi som vetenskaplig grund för utveckling av inhemska droger"; ett gemensamt projekt med vetenskapsakademin i Mongoliet "Att få nya lipo- och nanosomala former av droger med naturliga råvaror"; RFBR: 10-03-16001-mob_ros "Mobility of young scientists" (2010), 11-03-90705-mob_st vetenskapligt arbete (utbildning) av unga ryska forskare i Ryska federationens ledande vetenskapliga organisationer 2011 (2011).
Publikationer. Enligt resultaten publicerades 17 vetenskapliga papper, varav 3 publicerades i tidskrifter som rekommenderades av Ryska federationens försvarsdepartementets högre beviskommission.
Avhandlings omfattning och struktur. Avhandlingsarbetet presenteras på 172 sidor typskrivet text och består av introduktion, litteraturöversikt (1 kapitel), experimentell del (4 kapitel), allmänna slutsatser, referenslista och applikationer. Arbetet illustreras med 37 bord och 61 figurer. Det bibliografiska indexet innehåller 139 källor, inklusive 42 utländska.
I introduktionen understryks ämnesens relevans, syftet och målen för forskningen formuleras, den vetenskapliga nyheten och den praktiska betydelsen av arbetet presenteras.
Det första kapitlet (litteraturöversikt) presenterar data om den kemiska sammansättningen, spektret för farmakologisk aktivitet, användningen av artemisia L.-släktet i traditionell och modern medicinsk praxis.
Det andra kapitlet (material och metoder) presenterar data om studieobjekt, metoder, enheter och reagenser, annan metodologisk information.
Det tredje och fjärde kapitlet ger data om studien av de anatomiska och diagnostiska tecknen på Severs S och ett år gammal. Enligt metod
UV-spektrofotometri bestämde det totala innehållet av flavonoider och tanniner i studieobjekten. Med hjälp av GC-MS undersöktes den kvalitativa och kvantitativa sammansättningen av essentiell olja och fettsyror av malurt. HPLC-MS-metoden fastställde kvalitativa och kvantitativa innehåll av flavonoider. Den elementära sammansättningen av växter bestämdes med AAS-metoden. En teknik för kvantifiering av artemisinininnehåll har utvecklats och föreslagits. av HPLC-MS. Dessutom undersökte vi de kemiska kompositionerna av de eteriska oljorna av de fem typerna polynyor som oftast finns på Buryatia och Mongoliet, Gmelin Artemisia gmelinii Webmalm. et Stechm., malurt, grå Artemisia glauca Pall, ex Wild., malurt, storskrädd Artemisia macrocephala Jacq. ex Bess., Sievers malurt Artemisia sieversiana Willd. och Artemisia Annua L.
Det femte kapitlet innehåller data om standardiseringen av örnen av Sivers och P. av den ettårige, föreslagna som lovande källor till chamazulene respektive artemisinin.
Huvudinnehållet i arbetet
Föremål och metoder för forskning. Syftet med studien var prov av gräs från Sivers och årliga byar samlade i olika distrikt i Republiken Buryatia (Ivolginsky, Pribaikalsky, Selenginsky, Tunkinsky, Zakamensky, Kurumkansky) i Irkutskregionen (Olkhon Island) och Mongoliet (Selenginsky Aimak) från 2008 fram till 2011
Mikroskopisk analys utfördes i enlighet med artikeln "Teknik för mikroskopisk analys" (GF XI, nummer 2) på Mikmed mikroskop (Lomo, Ryssland) med ett okular 10x; linser 4x, 10x, 40x och MS-300 (TFXS), Fluorescerande System Set (Mikro, Österrike) med ett okular 10x; linser 4x, 10x, 40x. Utbytet av råmaterial bestämdes med metoden för redovisningsställen.
Extraktion av den eteriska oljan utfördes genom hydrodestillation, extrakt erhölls genom ultraljuds extraktion, CO2-extraktion och macerering.
Studien av dessa objekts kvalitativa och kvantitativa sammansättning utfördes genom följande metoder - GC-MS, HPLC-MS, TLC, BC, UV-spektrofotometri och AAS. Kromato-masspektrometrisk analys utfördes på en Agilent 6890-gaskromatograf med en HP MSD 5973N kvadrupolmasspektrometer (Agilent Technologies, USA; kolonner: HP-5ms, g = 0,25 mm, filmtjocklek 0,25 um (sampolymer-5%, difenyl - 95% dimetylsiloxan) och DBWax med en inre diameter av 0,25 um, bärargas - helium, g) flöde 1-1,5 ml / min; HPLC-MS-analys utfördes på högpresterande vätskekromatografer Finnigan Surveyor (Thermo Scientific, USA) och Agilent 1200 (Agilent Technologies,
USA) med mass-selektiv detektor "LCQ Advantage MAX" ("jonfälla") av varumärket "Finnigan" (Thermo Scientific, USA) och med en tandemmasspektrometrisk detektor ("ion trap") 6330 (Agilent Technologies, USA), metod joniseringselektrospray; betingelser: Hypersyl Gold Cl8, 5 mikron, 150x4 mm kolonner (Thermo Electronic Corporation, USA) och Zorbax Eclipse C18, 5 mikron, 4,6 * 150 mm (Agilent Technologies, USA), elueringsflödeshastighet 0,5 ml / min. TLC-analys utfördes på Sorbfil PTSH-P-A-UV-plattor (Imid Ltd, Ryssland); BC-analys utfördes på FN 6-papper (Filtrak, Tyskland); Absorptionsspektra registrerades på en StellarNet Green Waiv-spektrometer (StellarNet Inc, USA). AAC-analys utfördes på en SOLAAR MB spektrofotometer (Thermo Scientific, USA) och Varían-modellen AA240 (Varian, Ryssland).
Statistisk bearbetning av experimentella data utfördes med metoden för variation-statistisk analys. En del av data bearbetades av CIM (mjukvarupaket Sirius version 6.0, Pattern Recognition Systems, a / s, Norge).
Farmakognostiska egenskaper hos örterna P. Sivers och P. av sommaren. Följande indikatorer på kvaliteten på medicinska råvaror. Siver malurt gräs. Hela råvaror. Fasta eller delvis löviga toppar av blommande stammar som inte är mer än 45 cm långa, innehåller inte grova delar av stammen. Stam pubescent, rak, ribbad och förgrenad. Radikala och mellersta blad är petiolerade, trekantiga, tre gånger pinnate, avlånga platta skivor, 1,4 - 2,5 cm långa, 0,1 - 0,5 cm breda. Korgar halvkärlsformade, 0,4 - 0,6 cm i diameter, bred panikulera blomställning. Kantpistillatblommor (det finns cirka 18). Blommor bisexuella, många, med en trattformad corolla.
Gräs malurt årligen. Hela råvaror. Fasta eller delvis löviga toppar av blommande stammar som inte överstiger 50 cm långa, innehåller inte grova delar av stammen. Stammen är rak, rak, furrowed, grön i början av växtsäsongen, mörk lila i slutet. Bladet på den nedre och mellersta stambladen är ovoid eller oval, 1,5-7,0 cm lång på petiole, elliptisk i längd, utan vingar, tre gånger överuttryckta till breda segment, segment och segment, 0,5 till 0,8 cm lång, inte bred mer än 0,2 cm. Korgar med en diameter av ca 0,2 cm i panikulerblomställning.
Vid en anatomisk studie av gräset av P. Sivers och P. ett år identifierades ett antal anatomiska och diagnostiska egenskaper. Strukturen av lövträets blad framgår av tabell 1. Stammen av Sivers malurt är grov, de långsträckta epidermis cellerna.
Det finns eteriska oljekörtlar, T-formade hår och runda mageceller. Stammen har en buntypsstruktur. I revbenen är de smala områdena. Collanteralbalkar arrangerade i en cirkel kännetecknas av starkt utvecklad sclerenchym. Väl märkt endoderm, bestående av stora, tunnväggiga celler av rund form, tätt intill varandra.
Karakteristik av bladets anatomiska struktur Sivers och p. Ettårigt __
Siver malurt epidermis malurt årligen
övre rak vägg
nedre lindningsväggen är lågamplös
typ av Ustigichesky-apparatur övre anomocytiska
lägre anomocytisk, stomata mer än på bladets övre sida
stomata oval form med lentil stomatal celler
Kännetecken hos hår täta pubescenta med T-formade hår som består av två-, fyrcelliga ben och multicellulära flagellerade hår, det finns två typer av hår - stellat och T-formad med ett multicellulärt ben
terpenoidhaltiga strukturer är multicellulära stora essentiella oljekörtlar. schizogena behållare och ospecialiserade parenkymala celler
vid punkten av ettårigt, grovt, nästan naket stam, långsträckta epidermis celler. I ettårigets stjälk, liksom i s. Sivers stilk, en puchkovy-typ av struktur, finns det eteriska oljekörtlar, sällan hår och ovala stomatalceller; I båda typerna av malurt är de epidermala cellerna på rörformiga blommor tunnväggiga, långsträckta med spetsiga ändar, kännetecknade av närvaron av ett stort antal eteriska oljekörtlar och frånvaron av hår.
Merchandising indikatorer har upprättats på flera partier av råvaror:
Siver malurt gräs. Aska olöslig i 10% saltsyra (högst 2%), extraktionsmedel (inte mindre än 33%), lämnar brunt och svartnat (högst 5%) ), organisk förorening (högst 2%), mineralförorening (högst 0,5%).
Gräs malurt årligen. Luftfuktighet högst 7%, totalaska (inte mer än 9%), aska olöslig i 10% saltsyra (högst 1%), extraktionsmedel (minst 42%), lämnar brunt och svartnat (högst 5%), organisk förorening (högst 2%), mineralförorening (högst 0,5%).
Enligt resultaten av en preliminär fytokemisk analys hittades essentiell olja, flavonoider, tanniner, hydroxikinnaminsyror, koumariner, fettsyror och sesquiterpenla-loner i gräset i Sivers och P.
Lager av Sivers och P. på ett år. Tabell 2 ger data om utbyten, biologiska (BZ) och operativa reserver (EZ) av Sivers, och årligen, växer i olika områden av Buryatia.
Lager av råvaror av S. Sivers och p. Av ett år i områden av Buryatia
skördområde (g / m2) totalt E överväxt, (ha) BS (kg) EZ (kg)
env. Gusinoozersk city 58,0 ± 4,1 0,8 530,0 398,4
env. a. Ganzurino 33,8 ± 2,4 0,4 154,4 116,0
env. a. Borater 220,6 ± 15,1 20,0 50160,0 41100,0
env. med Taphar 500,0 ± 26,3 0,5 2763,0 2237,0
env. a. Sotnikovo 240,2 ± 19,4 25,0 69750,0 52850,0
env. Ulan-Ude 500,0 ± 32,5 0,5 2815,0 2175,0
Kabansky-distriktet 285.SH = 19,7 30,0 97320,0 73680,0
Tunkinsky District 70,0 ± 8,0 0,2 172,0 108,0
Pribaikalsky District 280,9 ± 25,3 1,0 3315,0 2297,0
Kurumkansky-distriktet 370,6 ± 34,0 0,1 438,6 302,6
env. a. Hurumsha 228,0 ± 10,8 0,6 1497,6 1238,4
env. Befolkning 500,0 ± 46,2 30,0 177720,0 122280,0
env. a. Sotnikovo 39,0 ± 2,1 25,00 10800,0 8700,0
Kabansky District 400,0 ± 27,1 30,0 136260,0 103740,0
Produktiviteten av ovanstående del av Sivers malurt och den årliga p. I de studerade tjocklekarna varierar från 33,8 ± 2,4 till 500,0 ± 32,5 g / m2 respektive från 39 ± 2,1 till 500 ± 46,2 g / m2. Biologiska och industriella lager antenn delar av testplantorna 154.4-97320.0 kg 116.0-73680.0 kg (Sievers malört) 1497.6177720.0 kg 1238.4-122280.0 kg (söt malört).
Kemisk studie av örter av P. Sivers och P. av de årliga Flavonoiderna. Definierad kvantitativ totala flavonoid innehåll genom den vanliga metoden för spektrofotometrisk bestämning i gräs n. Sievers och n. Annual, baserat på luteolin-7-glukosid i olika stadier av växtens utveckling (vegetationen, spirande, blomning, fruktkroppen). Det högsta innehållet av flavonoider fastställdes i prov av Severs och ettåriga prov som samlats in i den spirande fasen - 0,68 och 0,66%, det lägsta - i råmaterialet som samlats in i fruktfasen - 0,31% och 0,38% (tabell 3).
Det kvantitativa innehållet av mängden flavonoider i form av luteolin-7-glukosid i P. Sivers gräs och i gräset av P. ett år beroende på vegetationsfasen
växtutvecklingsfas, mängden flavonoider, vad gäller luteolin-7-glukosid (%)
Malurt Sivers malurt årligen
vegetation 0,67 ± 0,02 0,64 ± 0,04
spirande 0,68 ± 0,05 0,66 ± 0,03
blommande 0,48 ± 0,03 0,52 ± 0,02
fruiting 0,31 ± 0,01 0,35 ± 0,01
Följande flavonoider detekterades med HPLC-MS-metoden: rutin, luteolin-7-glukosid, chryo-eriol, quercetin i Sivers gräs och i ettårigt gräs (fig 1).
Fig.1. Kromatogram av flavonoider och P. Sivers, P. ett år.
Den externa standardmetoden användes för att bestämma det kvantitativa innehållet av rutin, chryseriol, quercetin i Sivers gräs och i det enåriges gräs (Tabell 4).
I båda typerna av Artemisia i största möjliga mängd innehåller luteolin-7-glukosid 0,04-0,08% (n Sievers.) Och 0,88-1,77% (n Annual.), Den lägsta - 0,001% quercetin (. N Sievers) Och 0.0070.009% (n. årlig).
Det kvantitativa innehållet av flavonoider (HPLC-MS)
Sivers malurtflavonoid samling (%)
rutinquercetin luteolin-7-glukosid
Ivolginsky distriktet, okr. a. Taphar, 0,002 ± 0,0001 0,001 ± 0,0002 0,040 ± 0,003
Ivolginsky distriktet, okr. sotnikovo 0,002 ± 0,0002 0,001 ± 0,0001 0,080 ± 0,005
FLY är ett år gammal och Ivolginsky distriktet, okr. sotnikovo 0,018 ± 0,001 0,007 ± 0,0003 0,880 ± 0,004
Kabansky distrikt, okr. a. Kackerlacka 0,012 ± 0,002 0,009 ± 0,0003 1,700 ± 0,005
Fettsyror. Malmprover innehåller från 8 till 13 fettsyror. Gemensam för båda typerna är palmitinsyra (16: 0), linolsyra (18: 2p6), linolensyra (18: ASAL) syra i en mängd av från 56,87 till 82,67% (av totala fettsyror) i n Sievers, 58,36-67,19% en. n. ett år (av totala fettsyror). Förutom dessa syror innehåller en signifikant mängd 10-oktadekensyra (18: 1p8) från 3,64% till 11,65%. Också i alla prover upptäcks 10-metyl-undekansyra (¡° 12: 0) och 12-metyltetradekansyra (och 15: 0) syror, deras innehåll överstiger inte 1%. Kromatogram visas i figur 2.
Fig. 2. Fettsyror Kromatogram (a) n Sievers och (b) av den årliga (I - (16:.. 0), 2 - (18: 2p6), 3 - (18: ASAL) 4 - (18: 1P8) ).
Elemental komposition. I gräset av S. Sivers, som växer i olika regioner av Buryatia, är kalciumhalten 0,56 ± 0,02-0,89 ± 0,03%, magnesium - 0,12 ± 0,01-0,28 ± 0,01%. Det högsta innehållet av kalcium och magnesium noteras i prov som samlats i Kurumkansky-distriktet, det lägsta innehållet av magnesium i råvarorna från Tunkinsky-distriktet och kalcium i växter samlade i Selenginsky-distriktet. Järn finns mestadels i växter från Kurumkansky-regionen
(141,25 ± 12,13 mg / kg), mindre - från Selenginsky-distriktet (141,25 ± 12,13 mg / kg).
Innehållet av zink varierar från 23,73 ± 1,56 till 59,8 ± 1,56 mg / kg - п. Sivers och från 55.32 ± 0.83 till 66.50 + 0.89 mg / kg är ettårig, vilket är acceptabelt för biokemiska processers normala funktion. Kopparhalten är 8,42 ± 0,45-24,30 ± 1,56 mg / kg -n. Sivers, 9,37 + 0,18-13,48 + 0,44 mg / kg - ett år gammalt (den önskade mängden är från 5 till 30 mg / kg). Nickeln i gräset i Seabera innehåller 0,40 ± 0,01 -2,06 ± 0,03 mg / kg, vilket motsvarar en växtbehov på 0,1 till 5 mg / kg. Koboltinnehållet i växten bör inte överstiga 1 mg / kg, bly - 10 mg / kg, kadmium - 0,2 mg / kg, krom - 1,0 mg / kg (Kabata-Pendias, 1989; Kashin, 2009). I Sec Sievers kobolthalt av mindre än 0,3 mg / kg, bly -.. 3,19 ± 0,11 mg / kg, n Annual - 0,59 ± 0,02 mg / kg Kadmium -0,18 ± 0,02 mg / kg, krom - 0,76 ± 0,02 mg / kg i alla prover. Således är innehållet i makro- och mikronäringsämnen i koncentrationer som är normala och tillräckliga för flödet av vitala funktioner för växter.
Siver malurt ört eterisk olja. Essentiell olja från växter isolerades genom farmakopémetod nr 2. I olika prover av s. Sivers eterisk oljeinnehåll varierar från 0,1 till 1,9%. I de essentiella oljorna i Sivers, som växer i olika delar av Buryatia, har mer än 80 föreningar identifierats.
Vi har undersökt sammansättningen av eteriska oljor isolerade från gräset av Sivers malurt, som växer i olika delar av Buryatia
(Ivolginsky (1), Selenginsky (2), Kurumkansky (3), Pribaikalsky (4,9),
Tunkinsky (5), Zakamensky-distrikten (8)), Irkutsk-regionen (Olkhon Island) (6) och Mongoliet (7). Det högsta utbytet av eterisk olja är i Sivers malurt som växer i Tunkinsky och Kurumkansky regioner (0,4%). Den minsta mängden olja isolerades från växter samlade på territoriet Zakamskij, Pribaikalsky-regionen och Mongoliet (0,1%) (figur 3).
Dynamiken för ackumulering av eterisk olja studerades beroende på fas av växtutveckling (figur 4). Resultaten visade att oljan i största möjliga mängd ackumuleras i blomningsfasen (0,6%), i
Fig. 3. Utbytet av eterisk olja s. Sivers från växlingsplatsen.
faser av spirande och fruiting ackumulera samma mängd eterisk olja (ca 0,3%).
L-1,8-daneol-I-terpineal-4 3-p-farmakom 1 ■ sishna-4,11-dnen
Fig. 5. Kromatogram av eterisk olja s. Sivers.
Fig. 4. Utbytet av eterisk olja s.
Sivers på olika faser av växtutveckling (växande säsong, b - spirande, c - blommande,
Alla ingredienser i essentiell olja kan delas in i två grupper - konstant, det vill säga i oljan i alla faser av växtutveckling och sporadiskt framträdande (mindre). I alla prover av Sivers essentiella olja, oberoende av växtodlingsområdet, 1,8-cineole (2,34-22,57%), terpineol-4 (0,964,70%), germacrene E (8,66-12,36%), P-farnezen (0,64-5,17%), Selina-4,11-dien (0,97-4,66%), Neril-2-metylbutanoat (4,80-8,79%) och Chamazulen (0,60-25,36%) (Fig 5).
Eteriska oljor, isolerade från växter som växer i Steppe-regionerna, i Pribaikalsky-distriktet (25,36%), innehåller den minsta mängden hamazulene och den minsta - i Zakamensky-distriktet (0,60%).
I sammansättningen av essentiell olja isolerad från växter vid olika utvecklingsfaser - vegetation, spirande, blommande och fruiting identifierades 54 föreningar. De konstanta komponenterna är 1,8-cyneol, linalool, terpineol-4, a-terpineol, p-farnezen, selina-4,11-dien, chamazulen.
Innehållet av chamazulen varierar från 0,20 till 24,69% i vegetationsfasen, från 21,34 till 61,91% i den växande fasen, från 1,53 till 34,42% i blomningsfasen, från 10,87 till 20,64% i fruktningsfasen. Satsen av sporadiskt förekommande komponenter är signifikant (upp till 40 föreningar) samtidigt låg i deras kvantitativa innehåll, varför det är svårt att identifiera beroendet av deras sammansättning på fasen av växtutveckling.
För att bedöma påverkan av utvecklingsfasen på oljekomponenterna användes CIM (fig 6).
Fig. 6. GK-modell av komposition
essentiell olja från utvecklingsfasen av Sivers (I-vegetation, 2-blommande, 3-blommande, 4-fruiting)
Det här är en av analyserna
multidimensionell data, som tillåter att allokera dolda variabler i stora dataställningar och analysera relationer,
existerande i det studerade systemet. Målet med huvudkomponentmetoden är att ersätta den ursprungliga beskrivningen av prover med hjälp av p-variabler för en ny form, representerad inom ramen för huvudkomponenterna (Esbenson, 2010).
På GK-modellen är det möjligt att särskilja separata områden avgränsade från varandra och motsvarande olika utvecklingsfaser av Sivers malurt, vilket indikerar att oljens sammansättning vid olika utvecklingsfaser skiljer sig från innehållet i mindre föreningar.
Således sammanfaller den kvalitativa sammansättningen av essentiell olja i olika faser av Sivers-utvecklingen i konstant och skiljer sig åt i mindre föreningar.
En studie på faserna av växtutveckling visade att den största mängden chamazulen i essersoljan i Seversa är koncentrerad i spirande och blommande faser medan ackumulationen av olja i blomningsfasen är större än i den växande fasen. Under dessa faser studerade vi därför särdragen hos ackumulering av eteriska oljor i olika delar av växten (figur 7).
Om fasen av spirande I blomningsfasen
Fig. 7. Utbytet av eterisk olja i olika delar av Sivers.
extraherbar eterisk olja från olika delar av växter i blomningsfasen visade att blomställningar (korgar) präglas av högsta utbyte, löv är mindre och stammar är minimala. I fas
spirande i gräset av P. Sivers är mest av allt innehöll olja i knopparna, något mindre i bladen och minsta mängd olja i stjälkarna.
En analys av den essentiella oljan från olika delar av växten visade att komponentkompositionen av oljan extraherad från blomställningarna och gräsknopparna hos Sivers är mest olika är mer än 70 komponenter, då är mer än 40 komponenter från bladen och mindre än alla föreningarna i oljan extraherad från stammarna cirka 20 komponenter. De konstanta komponenterna i de eteriska oljeproverna, oavsett plats, är 1,8-cyneol, linalool, terpineol-4, germacren 13, a-terpineol, a-bisabolol och kamazulen (tabell 5).
Konstanta komponenter av Siver Wormwood Essential Oil
komponenter innehåll av komponenter i% av hel olja
blommande faspudlande fas
blomställningar lämnar stjälkar knoppar lämnar stjälkar
1,8-cineol 8,00 6,39 6,04 1,94 + 23,41
linalool 5,93 1,38 0,65 + + 3,83
terpineol-4 2,56 2,10 0,57 0,88 + 5,37
a-terpineol 2,39 2,10 0,82 1,44 + 4,66
Germakren E 7,20 7,81 1,96 11,18 7,81 10,57
a-bisabolol 2,28 1,25 1,66 5,24 10,93 5,86
Chamazulene 6,23 23,02 37,11 7,81 21,17 3,51
Analysen visade att den kvalitativa sammansättningen av essentiell olja i olika tillväxtområden, vid olika utvecklingsfaser och i olika delar av Seversa, sammanfaller i konstant och skiljer sig i sporadiskt förekommande föreningar.
Essentiell olja av malurt årlig ört. Som i det första fallet utfördes urvalet av essentiell olja genom farmakopémetod nr 2. Den kemiska sammansättningen av p. Årliga eteriska oljor representeras av 40 komponenter. De konstanta komponenterna är artemisiaketon (10,24-14,62%), karyofyllen (9,93-10,71%), germacren B (3,53-7,82%), p-selenen (21,75-29,46%), karyofillenoxid (4,44-14,31%) 8).
Vid olika stadier av växtutveckling extraheras 0,5 till 0,7% eterisk olja från malurtens ört. Det högsta utbytet av eterisk olja i blomningsfasen (0,7%) (Fig.9).
I alla stadier av växtutveckling finns artemisiaketon, karyofiller (3-selen, karyofylnoxid) i essentiell olja. Det kvantitativa innehållet av huvudkomponenterna förändras vid olika faser av växtutveckling. och karyofillenoxid - i blomningsfasen.
3. Kromatogram av eterisk olja s. Ett år.
Fig. 9. Utbytet av eterisk olja s. Årlig i olika faser av växtutveckling (in-vegetation, b-bud, c-blomning, p-fruiting).
De essentiella oljekörtlarna är ojämnt fördelade i växten, och från olika delar av växten kan essentiella oljor särskiljas, vilket skiljer sig både kvantitativt och kvalitativt.
Särskilda egenskaper för ackumulering av eteriska oljor i blomningsfasen i olika delar av den årliga malurt (Fig 10) har bestämts.
Mer än 60 föreningar hittades i eteriska oljor från olika delar av växten. konstant
Komponenter för oljor från blomställningar, löv, stjälkar är artemisiaalkohol, p-karyofiller, oxid
Huvuddelen av den årliga eteriska oljan är artemisiaketon - det finns inte i oljan från stjälkarna, även om det är hälften i oljan från blomställningar (49,14%) och nästan en tredjedel av bladen (29,76%).
Analysen av eteriska oljor visade att i olika utvecklingsfaser i olika utvecklingsfaser och i olika delar av n. Årlig gräs, liksom n. Sieversgräs, är den essentiella oljans kvalitativa sammansättning densamma i konstant och annorlunda i sporadiskt förekommande komponenter.
Utveckling av en metod för kvantitativ bestämning av artemisinin i malurt genom en årlig metod HPLC-MS
Val av villkor för kvantitativ extraktion av artemisinin från den årliga malurt. Att utveckla en kvantitativ metodik
1 2 i fig. 10. Utbytet av eterisk olja i olika delar av den årliga (1-blomställning, 2-blad, 3-stammar).
Artemisinin bestämningar i gräset P. av ettåriga extraktionsbetingelser valdes under vilka utvinningen av artemisinin når sitt maximala värde. Extrakten erhållna genom metoderna för macerering, ultraljuds extraktion och subkritisk CO2-extraktion analyserades. Olika lösningsmedel användes som extraktionsmedel (tabell 6). Innehållet av artemisinin i extrakt separerade genom ultraljuds extraktion och macerering med olika lösningsmedel är inte signifikant olika (0,038-0,040%). Den största mängden artemisinin (0,054%) finns i extraktet erhållet under subkritisk CO2-extraktion.
Metoder och parametrar för extraktion av extrakt från gräs av malurt en årig genom olika utvinningsmetoder ______
extraktionstid extraktionsmedel extraktionstid / extraktionsparametrar artemisininhalt i%, i termer av a.s.s.
etanol 24 h / förhållande råmaterial: lösningsmedel (1: 5), T = 25 ° С 0,040 ± 0,002
Maceration etanol 48 h / förhållandet av råmaterial: lösningsmedel (1: 5), T = 25 ° С 0,038 ± 0,002
Hexan 24 h / Prov: lösningsmedelsförhållande (1: 5), T = 25 ° С 0,039 ± 0,002
etylacetat 15 min / förhållande råmaterial: lösningsmedel (1: 5), ljudfrekvens 50 kHz, T = 25 ° С 0,022 ± 0,001
etanol 5 min / förhållande råmaterial: lösningsmedel (1: 5), ljudfrekvens 50 KHz, T = 25 ° С 0,022 ± 0,001
Ultraljuds extraktion av etanol 10 min / Förhållande mellan råmaterial: lösningsmedel (1: 5), ljudfrekvens 50 KHz, T = 25 ° С 0,024 ± 0,001
etanol 15 min / förhållande råmaterial: lösningsmedel (1: 5), ljudfrekvens 50 KHz, T = 25 C, C 0,039 ± 0,002
etanol 20 min / förhållande råmaterial: lösningsmedel (1: 5), ljudfrekvens 50 kHz, T = 25 ° С 0,039 ± 0,002
CO2-extraktion av CO2 24 h.1 flödeshastighet 30 l / h, T = 20-22 ° C, P = 6,0-6,2 MPa 0,054 ± 0,003
Av alla föreslagna metoder för extraktion är ultraljuds extraktion optimal (etanol extrakt), eftersom denna metod är snabb (extraktionstid 15 minuter) och tillgänglig genom instrumentation.
Metod för kvantitativ bestämning av artemisinin.
Utvecklingen av en teknik för kvantitativ bestämning av artemisinin i årets örter utfördes av HPLC-MS. Vi använde Agilent 1200 HPLC med en MC-detektor ("ion trap") 6330, en joniseringsmetod - elektrospray. Eluering utfördes i isokratiskt läge (50% (A): 50% (B)), sammansättningen av utgångsbuffertens (A) vattenhaltiga lösning av myrsyra (pH = 3) + 2 ml av en mättad lösning av ammoniumacetat, elueringsbuffert (B) acetonitril. Den volymetriska flödeshastigheten för elueringsmedel är 0,5 ml / min, volymen av det injicerade provet är -25 | il. Ioner registrerades i övervakningsläget för positivt laddade joner (SRM) med en massa av 300 (på grund av tillsatsen av NrH4-jon till artemisininmolekylen), fönsterbredd (299301) m / z. Resultaten bekräftades genom tandem-masspektrometri; en dotterjon (MS2) med en massa av 223 m / z erhölls från moderjonen (MS) med en massa av 300 m / z.
Sammanträffandet av retentionstider och massspektra av artemisinin, bestämt i ett års årigt gräs med användning av CO-lösningen av den angivna föreningen, tillåter oss att dra slutsatsen att den rena föreningen är identisk med ren artemisinin (Fig.11, 12).
Fig. 11. Kromatogram av CO artemisinin och P. årligt extrakt.
iv ix язтаяауат ассс »
Figur 12. Masspektra av a) artemisinin innehållet i n. Årligt gräs, b) av artemisinin CO.
För kromatografi-masspektrometri användes en absolut kalibreringsmetod för kvantitativ analys. För att bestämma kalibreringskurvens koefficient framställdes flera (minst 20) kalibreringslösningar av artemisisinin. Framställning av lösningar utfördes enligt följande: 5 * 10 "3 g artemisinin vägdes, placerades i en 50 ml volymkolv, 25 ml acetonitril tillsattes. Innehållet i kolven
blandas noggrant tills fullständig upplösning, varefter volymen i kolven bringades till märket med destillerat vatten. Genomförd analys vid olika volymer av det injicerade provet från 1 till 40 μl. Topparean i kromatogrammen mättes. Enligt de erhållna data konstruerades en kalibreringskurva (fig 13). Värdena på toppområdet plottades på ordinataxeln och motsvarande värden av artemisininhalten (g) plottades på abscissaaxeln.
Från de erhållna dataen beräknades kalibreringskurvens koefficient: к = Б / х, där к är kalibreringskurvens koefficient, 5 är toppen av den analyserade lösningen, x är innehållet av artemisinin (g)
Kalibreringskurvens koefficient (k) definieras som det aritmetiska medelvärdet av koefficienterna k,.
Fig. 13. Gradueringsschema för bestämning av artemisinininnehåll.
Artemisininhalten i det etåriga malurt-extraktet bestämdes med formeln: C = 5 / c, där 5 är toppytan av artemisinin i den analyserade lösningen och k är kalibreringskurvens koefficient. Metrologiska data om bestämning av kalibreringskurvan (k) koefficient anges i tabell 7.
Metrologiska egenskaper vid beräkningen av koefficienten för kalibreringskurvan artemisinin
1 X Э2 Э РЮЮ) Дх Е,%
19 1,32 * 10m 1,84 * О15 4,25 * 10 "95 2,09 1,28 * 10" 1,97 1,90 * 10 "
Resultaten av den kvantitativa bestämningen av artemisinin i malurt årligt extrakt presenteras i tabell 8.
Resultaten av den kvantitativa bestämningen av artemisinin i extraktet av malurt en-årsmetod HPLC-MS
Metrologiska egenskaper (n = 5, P = 95%)
0,039 0,75 * 10 "'0,27 * 10" 2 2,57 0,83 * 10 ° 1,21 0,12 * 10 "'
Den utvecklade metoden bestämde kvantitativt innehåll av artemisinin i gräset n. Ettårigt i blomningsfasen (Tabell 9). Tekniken är validerad - specificitet, precision bekräftad.
Innehållet av artemisinin i gräsmalm årligen
Artemisinin-området och datum för insamling (%)
Ivolginsky distriktet, 10 km från Sotnikovo, 08/12/2010 0,054 ± 0,003
Ivolginhiy rn, 10 km från Sotnikovo, 08/22/2011 0.027 ^.001
Ivolginsky distriktet, okr. a. Oriole, 08/19/2011 0.069 ± 0.004
Kabansky distrikt, okr. a. Tarakanovka, 08.22.2011 0.023 ± 0.001
I prover samlade i Ivolginsky-regionen, i närheten av Oriole innehåller den högsta mängden artemisinin (0,069%), de minsta - i proverna från Kabansky District, okr. a. Kackerlacka (0,023%). Det fastställdes att den största mängden artemisinin växt koncentreras i blomningsfasen - 0,039%, den minsta - i vegetation och spirande faser - från 0,006 till 0,007%. Artemisinin blomställningar innehåller - 0,029%, något mindre - 0,021% i bladen, och minsta mängd i stjälkarna är 0,007% (Tabell 10).
Innehållet av artemisinin i gräset av malurt årligen, beroende på vegetationsfasen, i olika delar av växten
utvecklingsfas av växten
vegetation spirande blommande lämnar blomställning stammar
0,006 ± 0,0002 0,007 ± 0,0002 0,039 ± 0,003 0,021 ± 0,001 0,029 ± 0,002 0,007 ± 0,0002
Den optimala tiden för insamling av gräs av den årliga malurt är således blomningsfasen, och det är lämpligt att samla hela antenndelen.
Alla erhållna resultat ingår i FS-projekten på gräset av Sivers malurt och ört av den årliga malurt.
1. De viktigaste diagnostiska egenskaperna hos gräset av Sivers och P. ettårigt gräs avslöjades, de numeriska indikatorerna som behövs för standardisering av råmaterial utvecklades. Resterna av Sivers och P., som växer i olika delar av republiken Buryatia, identifieras.
2. Innehållet av flavonoider, fettsyror, makro- och mikronäringsämnen i gräset av Sivers n och i gräset av n. Ett år inrättades. Flavonoider - luteolin-7-glukosid, rutin, quercetin och chryoeriol detekterades med HPLC-MS-metoden i dessa växter. De viktigaste fettsyrorna i de studerade typerna av malurt är palmitinsyra, linolsyra, linolensyra, 10% oktadekensyra finns också i betydande malurt.
3. Det har fastställts att den etiska oljens kvalitativa sammansättning är konstant oavsett växlingsplatsen och utvecklingsfasen. De konstanta komponenterna i Sivers är 1,8-cyneol, terpineol-4, D-germakren, p-farnesen, Selina-4,11-dien, neyl-2-metylbutanoat och kamazulen och Artemisia-keton, karyofiller, germacren ett år gammal D, p-selen, karyofiloxid. Uppsamlingen av eterisk olja i blomningsfasen är större (0,7%) än i den spirande fasen (0,3%). Den största mängden chamazulene s. Sivers ackumuleras i faser av spirande (upp till 62%) och blommande (upp till 34%).
4. Villkoren för extraktion av artemisinin (typ av extraktionsmedel, extraktionsmetod, extraktionstid) från den årliga örten bestämdes och det fastställdes att maximal extraktion av artemisinin uppnås med ultraljud och precrisisk CO2-extraktion. En metod för kvantitativ bestämning av artemisinin utvecklades och validerades i en ettårig HPLC-MS-metod (relativt fel vid bestämning av ± 1,21%). Det har fastställts att den största mängden artemisinin i gräset i en årlig ört ackumuleras under blomningsfasen i blomställningar (0,039%).
5. Utvecklade regleringsdokument för råvaror - projektet FS "Grass of Sivers malört" och projektet FS av "Gräs av malurt ett år".
Förteckning över uppsatser som publicerats på uppsatsens ämne
1. Zhigzhitzhapova, C.B. Den kemiska sammansättningen av essentiell olja Artemisia gmelinii Web. et Stechm, infödd till Centralasien / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva och Plant Chemistry.-2010.-№2.-С. 131-133.
2. Zhigzhitzhapova, C.B. Kemisk komposition av Sivers malört essentiell olja Artemisia sieversiana Willd., Odlad i Buryatia / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva, V.V. Taraskin // Bulletin of the Buryat State University. Ser. Kemi-Physics. - 2009. -med. 3. - s. 69-71.
3. Zhigzhitzhapova, C.B. Sammansättning av Siver malört essentiell olja Artemisia sieversiana Willd., Odlad i Buryatia och Irkutsk regionen / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva, V.V. Taraskin // Bulletin of the East-Siberian Scientific Center of the Sibirian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences. - 2009. - №2 (66). -C. 103-105.
4. Zhigzhitzhapova, S.V. Sammansättningen av essentiell olja Artemisia sieversiana Willd. vid olika faser av växtutveckling / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // Bulletin of the East-Siberian Scientific Center of the Sibirian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences. - 2011. - №1 (77). Del 2. - s. 138-141.
5. Soktoeva, TE Kompositionens komposition av essentiell olja Artemisia glauca Pall, ex Willd. Flora av Mongoliet / T.E. Soktoeva, S.V. Zhigzhitzhapova, LD
Radnaeva, B.B. Taraskin // Bulletin of young scientists. - Tomsk, 2011. -Vyp. 2. - s. 27-30.
6. Soktoeva, TE Den kemiska sammansättningen av essentiell olja Artemisia gmelinii Web. Et Stechm. / T.E. Soktoev // Lomonosov-2009: Material från XVI Intern. Conf. studenter, studenter och unga forskare. - Moskva, 2009. - s. 37.
7. Zhigzhitzhapova, C.B. Essentiell olja av malurt Gmelin flora Buryatia och Mongoliet / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // "Nya prestationer inom kemi och kemisk teknik för växtråvaror": Material från IV All-Russia. vetenskapligt. Conf. - Barnaul, 2009. - s. 49-50.
8. Soktoeva, T.E. Sammansättningen av den essentiella oljan av Sivers malört Artemisia sieversiana Willd., Som växer i republiken Buryatia / T.E. Soktoyeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Teknik och utrustning för kemisk, bioteknologisk och livsmedelsindustri": material av II Vseross. Scien. Conf. studenter, studenter och unga forskare. - Biysk, 2009. - s. 91-93.
9. Pavlova E.T. Kromatografisk separation och kvantitativ bestämning av komponenterna av läkemedel genom HPLC / TE Soktoeva, T.A. Kolodin // "Problem med hållbar utveckling av regionen": Material från Rysslands unga forskares 5: e skoleseminarium. - Ulan-Ude, 2009. - s. 222-223.
10. Zhigzhitzhapova, S.V. Jämförande analys av de kemiska kompositionerna av Artemisia L., växande i Centralasien / S.V. Zhigzhitzhapova, T.E. Soktoeva, L.D. Radnaeva, O. Grahl-Nilsen // "Modemmetoder för dataanalys" Sjunde vinterimposium på kemometri. - Sankt Petersburg, 2010. - s. 82-83.
11. Soktoeva, T.E. Jämförande analys av sammansättningen av essentiella oljor av polynien av släktet Artemisia L., odlas i Centralasien / TE Soktoeva // "Miljövänlig och resursbesparande teknik och material": material i regionen, ungdomsvetenskaplig. Conf. från intern. deltagande. - Ulan-Ude, 2010.-S. 109-110.
12. Zhigzhitzhapova, C.B. Eteriska oljor av artemisia L. / C.B. polynia genus. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // "Utvecklingen av traditionell medicin i Ryssland: Erfarenhet, forskning, perspektiv": material nauchn. Conf. från intern. deltagande. - Ulan-Ude, 2010. - s. 405-407.
13. Soktoeva, T.E. Sammansättningen av den essentiella oljan av syskon malurt Artemisia sieversiana Willd. / T.E. Soktoyeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Faktiska studier av Baikal Asien": Internets material. Scien. Conf, - Ulan-Ude, 2010. - s. 309-312.
14. Badmaeva, E.E. Sammansättningen av essentiell olja Artemisia macrocephala Jacq. ex Bess. växer i Mongoliet / E.E. Badmaeva,
TE Soktoeva // "Rysslands ekologi och angränsande områden": material från XV International. miljöcon. - Novosibirsk, 2010. - s. 325.
15. Badmaeva, E.E. Sammansättningen av essentiell olja Artemisia annua / EE. Badmaeva, T.E. Soktoeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Miljövänlig och resursbesparande teknik": material Vseross. ungdomskonferens. från intern. deltagande. - Ulan-Ude, 2011. -C. 156-157.
16. Soktoeva, T.E. Extraktion av artemisinin från malurt årliga Artemisia annua L. / T.E. Soktoeva, G.L. Ryzhov, K.A. Dychko, V.V. Khasanov, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Prioriteter och egenskaper vid utvecklingen av Baikal-regionen": material från Vth International. Scien. Conf. - Ulan-Ude, 2011. - s. 127-128.
17. Zhigzhitzhapova, C.B. Den kemiska sammansättningen av Artemisia Annua L. / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // "Vegetation av Baikal-regionen och angränsande områden": material från Vseross. Scien. Conf. - Ulan-Ude, 2011. - s. 152-153.
AAS atomabsorptionsspektrofotometri
saw absolut torra råvaror
Biologiskt aktiva substanser
GZ biologiska reserver
BH-papperskromatografi
WHO Världshälsoorganisationen
HPLC-MS högprestanda flytande masskromatografi
GF State Pharmacopoeia
ISC-metod för huvudkomponenter
CO-standardprov
dessa tunnskiktskromatografi
EZ operativa reserver
SRM Välj reaktionsövervakning
Författaren uttrycker sin uppriktiga tacksamhet till studiestudenten, D.Sc., prof. LD Radnaeva, samt doktorsexamen, seniorforskare Baikal Institute of Nature Management av den sibiriska grenen av den ryska akademin för vetenskaper Zhigzhitzhapova C.B, doktor i kemi, honorär professor Tomsk State University Ryzhova G.L. för hjälp och stöd vid utarbetandet av avhandlingen.
Den var inloggad i utskrift 11/21/2011. Format 60x84 1/16. Offsetpapper. Volym 1,5pech. l. Cirkulation 100. Beställningsnummer 67.
Tryckt i tryckeriet för förlag BNTS SB RAS. 670047 Ulan-Ude, Sakhyanova, 6.
Innehållsförteckning för Soktoevs avhandling, Tuyana Erdemovna :: 2011 :: Ulan-Ude
Kapitel 1. REVISION AV LITERATUR
Det aktuella läget för undersökningen av släktet Artemisia L.
1,1. Botaniska egenskaper hos Sivers malurt och 12 årliga malurt
1,2. Eteriska oljor och naturliga azulenplanter av släktet Wormwood
1.2.1. Den kemiska sammansättningen av eteriska oljor och naturliga azulen 14 växter av släktet Wormwood
1.2.2. Användningen av eteriska oljor av växter av släktet Wormwood i medicin
1,2. Artemisinin: upptäckt, struktur och syntes, fysikalisk-kemiska 31 egenskaper, mekanism för antiplasmodium-verkan
1,3. Fettsyrasammansättning av växter av släktet Wormwood
1,4. Fenoliska föreningar av växter av släktet Wormwood
1,5. Den elementära sammansättningen av växter av släktet Wormwood 38 SLUTSATSER TILL KAPITLET
KAPITEL 2. EGENSKAPER OCH METODERS KARAKTERISTIK 41 FORSKNING
2,1. Objekt av studier, prov av råvaror - gräs av Sivers malört och 41 ört av malurt årligen
2,2. Forskningsmetoder
2.2.1. Biologiska forskningsmetoder
2.2.1.1. Anatomisk och diagnostisk studie
2.2.1.2. Resursforskning
2.2.2. Metoder för kvalitativ och kvantitativ bestämning av 43 biologiskt aktiva substanser
2.2.3. Merchandising Analysis: Metoder för att etablera 50 av god kvalitet råmaterial
2.2.4. Metoder för statistisk bearbetning. Den huvudsakliga komponentmetoden.
KAPITEL 3. FARMAKOGNOSTISK ANALYS AV HERBAL HERBALIS 53 CIVERS
3,1. Mikroskopisk analys av Sivers malört ört
3,2. Sibers Wormwood Lager
3,3. Studien av de främsta BAS gräs syskonen malurt
3.3.1. Kvalitativt och kvantitativt innehåll av komponenterna 64 essentiell olja av Sivers malurt
3.3.1.1. Den kemiska sammansättningen och dynamiken av ackumulering av eterisk olja och 64 hamazulena i gräset av Siver malurt i olika områden av Buryatia
3.3.1.2. Särskilda egenskaper för ackumulering av eterisk olja och chamazulen i gräset av 65 Siver malurt i olika faser av växtutveckling
3.3.1.3. Sammansättningen av mindre delar av gräsens essentiella olja 71 Sivers malurt
3.3.1.4. Funktioner av ackumulering av eterisk olja och chamazulen i gräset 72 Siver malurt från olika delar av växten
3.3.2. Det kvalitativa och kvantitativa innehållet av flavonoider och tanniner i gräset av Sivers malurt
3.3.3. Fettsyrasammansättning av gräs av Sivers malurt
3.3.4. Elemental sammansättning av örtmaskiga årliga SLUTSATSER TILL KAPITLET
KAPITEL 4. FARMAKOGNOSTISK ANALYS AV HERBAL HERBALS 83 ENÅRÅR
4,1. Mikroskopisk analys av örtmaskar årligen
4,2. Lager av malurt årligen
4,3. Undersökningen av den huvudsakliga BAS gräsmalm årligen
4.3.1. Det kvalitativa och kvantitativa innehållet av de essentiella oljekomponenterna i örtmaskar årligen
4.3.1.1. Den kemiska sammansättningen och dynamiken av ackumulering av eterisk olja i 92 gräs av ettårigt malurt från olika tillväxtställen
4.3.1.2. Särskilda egenskaper för ackumulering av eterisk olja i gräset av malurt ^ årligen i olika utvecklingsfaser och i olika delar av växten
4.3.2. Kvalitativ och kvantitativ bestämning av flavonoider gräs 100 malurt årligen
4.3.3. Fettsyror sammansättning av ört malurt årliga ^ ® *
4.3.4. Elementets sammansättning av örtmaskar årligen
4,4. Utveckling av en metod för kvantitativ bestämning av artemisinin i 103 gräs av malurt genom en årlig metod för HPLC-MS
4.4.1. Val av villkor för kvantitativ extraktion av artemisinin från 103 ettårig malurt
4.4.2. Utveckling av en teknik för kvantitativ bestämning av artemisinin 104 genom HPLC-MS
4.4.3. Kvantitativt innehåll av artemisinin i den årliga malurt från olika tillväxtorter
4.4.4. Analys av det kvantitativa innehållet av artemisinin i gräset 107 malurt årligen på olika utvecklingsfaser och i olika delar av växten
KAPITEL 5. INSTÄLLNING AV INDIKATORERNA 111 GODKAP AV RÅMATERIAL
5,1. Morfometriska indikatorer på råmaterial
5,2. Standardisering av gräs syskon malurt
5.2.1. Merchandising indikatorer gräs Sills malurt!
5.2.2. Standardisering av Siver malört ört enligt innehållet av 115 hamazulelen i sammansättningen av eterisk olja
5.2.3. Etablering av hållbarhet av Sivers malörtgräs
5,3. Standardisering av ört malurt årligt ^ ^ ^
5.3.1. Varuindikatorer gräs sagebrush årlig * ^
5.3.2. Standardisering av örtmasket årligen på innehållet av artemisinin
5.3.3. Fastställa hållbarhetstiden för örtmaskar årligen
Införande av avhandlingen om ämnet "Farmaceutisk kemi, farmakognosi", Soktoeva, Tuyana Erdemovna, abstrakt
Relevans av ämnet. Växter släktet Artemisia (Artemisia) -perspektivnye källor till biologiskt aktiva substanser, sådana arter såsom dragon Artemisia dracunculus L., malört malört L., Artemisia vulgaris Artemisia vulgaris L. ofta används i traditionella, holistic medicin och livsmedelsindustrin. Artemisia annua Artemisia annua L. framgångsrikt införts i kulturen i många länder, och år 2001 blev rekommenderad av WHO som den främsta källan till artemisinin - första linjens behandling agent för malaria. Idag tillhandahåller länder som producerar artemisinin ungefär ett kvartalt globala hälsobehov [1, 2]. 137 biologiskt aktiva föreningar isolerades från det ettåriga, inklusive 40 sesquiterpener, 10 triterpener, 7 koumariner, 46 flavonoider, som kan tjäna som grund för läkemedelsutveckling [3]. På 80-talet av 20-talet försökte en grupp forskare [4] odla den vildväxande sektionen av Sovjetunionens ettåriga flora i ULI (Moskva). Nuförtiden utförs stora arbeten med introduktionen av första året på Tomsk State University. I Buryatia n. Annual är en vildväxande art.
Tillsammans med den ettårige i Buryatia är Sivers malört Artemisia sieversiana Willd. Utbredd, vilket också är en lovande art. I gräset av P. Sievers innehåller flavonoider, eterisk olja, koumariner [5-8]. Essentiell olja av Seabera är av intresse som en källa till Chamazulene, en giftfri förening med antiinflammatoriska, baktericida, regenerativa effekter [9, 10].
Hittills har en detaljerad kemisk studie av Sivers malurt och malurt av den årliga floran Buryatia inte utförts som lovande källor till biologiskt aktiva substanser, därför är deras undersökning en brådskande uppgift.
Mål: Farmakognostisk studie av Sivers malurt Artemisia sieversiana Willd. och malurt årliga Artemisia annua L. som värdefulla källor till biologiskt aktiva substanser.
För att uppnå detta mål är det nödvändigt att lösa följande uppgifter:
1. Identifiera de anatomiska och diagnostiska egenskaperna hos ovanstående del av Sivers p. Och p. Ett år, upprätta råvaruindikatorer för råvaror, utvärdera reserverna och möjligheten att skörda p. Av ett år och Sivers på Republiken Buryatias territorium.
2. Att studera den kemiska sammansättningen av huvudgrupperna av biologiskt aktiva substanser i dessa växter och bestämma deras kvantitativa innehåll, fastställa lokalisering av eteriska oljor och artemisinin i enskilda delar av växter, studera dynamiken i deras ackumulering i utvecklingsfaserna och bestämma de optimala uppsamlingsbetingelserna.
3. Att utveckla en metod för kvantitativ bestämning av artemisinin i den enåriges antenndel;
4. Bestäm kvalitetsindikatorerna och standarderna för innehållet av grundläggande biologiskt aktiva substanser, för att utveckla regelbunden dokumentation för läkemedelsråvaror - gräset av malmgräs och gräset av ettårig malurt.
Vetenskaplig nyhet. De viktigaste diagnostiska egenskaperna hos gräset i Sivers och P. årliga upprättades, de numeriska indikatorerna som behövs för standardisering av råvaror utvecklades.
En undersökning gjordes av den kemiska sammansättningen av Sivers gräs och av ettårigt gräs. Innehållet i eteriska oljor, flavonoider, fettsyror, makro- och mikroelementer bestämdes. Flavonoider - luteolin-7-glukosid, rutin, quercetin och chryoeriol detekterades med HPLC-MS-metoden i dessa växter. De viktigaste fettsyrorna i de studerade typerna av malurt är palmitinsyra, linolsyra, linolensyra, 10% oktadekensyra finns också i betydande malurt.
Villkoren för extraktion av artemisinin (typ av extraktionsmedel, extraktionsmetod, extraktionstid) från den årliga örten bestämdes och det fastställdes att maximal extraktion av artemisinin uppnås genom ultraljud och subkritisk CO2-extraktion. Med HPLC-MS har det fastställts att den största mängden artemisinin hos ettåringen finns i blomningsfasen i blomställningarna.
Studierad dynamiken av ackumulering av eterisk olja, beroende på utvecklingsfasen och delen av växten. Den största mängden chamazulene eterisk olja s. Siversa ackumuleras i faser av spirande och blommande i blomställningar.
De etablerade kvalitetsindikatorerna för BAS ingår i regleringsdokumenten.
Praktisk betydelse. Reserven och eventuella årliga upphandlingar av en uppgörelse av Sivers och en avveckling av ett år på Republiken Buryatiens territorium (avveckling av Sivers - från 0,1 till 73,7 ton per år och en avveckling på ett år, från 1,2 till 122,3 ton per år).
En teknik har utvecklats för kvantitativ bestämning av artemisinin i p. Gräs med en årlig HPLC-MS-metod. Villkoren för provberedning av råmaterial för analys för kvantitativ bestämning av artemisinin är vetenskapligt underbyggda.
Standardiseringen av råvaror har genomförts, FS-projekt har utvecklats - "Siver Wormwood Herbal" och "Wormwood One-Year Grass".
Graden av genomförande. Metoden för att extrahera information om essentiell olja och mikroskopisk analys testades och infördes i utbildningsförfarandet vid läkemedelsdepartementet vid Federal State Budget Educational Institution of Higher Professional Education "Buryat State University" (genomförande lag nr 1 av den 6 september 2011). Projekt av FS på gräs av Sivers malurt och ettårig malurt är beredda för övervägande.
Anslutning av arbete. Huvudbestämmelserna i avhandlingen presenterades och diskuterades vid: en vetenskaplig-praktisk konferens med internationellt deltagande "Utveckling av traditionell medicin i Ryssland: Erfarenhet, forskning, utsikter" (Ulan-Ude, 2010); 7: e vintersimposium om kemometri "moderna metoder för dataanalys" (Sankt Petersburg, 2010); den internationella vetenskapliga konferensen tillägnad 15-årsdagen av Buryat State University "Faktiska studier av Baikal Asien" (Ulan-Ude, 2010); V internationell vetenskaplig-praktisk konferens "Prioriteringar och egenskaper vid utvecklingen av Baikal-regionen" (Ulan-Ude, 2011); X internationell vetenskaplig-praktisk konferens "Problem med botanik i södra Sibirien och Mongoliet" (Barnaul, 2011); IV All-Russian Conference "Nya framsteg inom kemi och kemisk teknik för växtmaterial" (Barnaul, 2009); XVI International Conference of Students, Postgraduate och Young Scientists "Lomonosov-2009" (Moskva, 2009); XV Internationella ekologiska studentkonferensen "Ekologi i Ryssland och angränsande territorier" (Novosibirsk, 2010); II All-Russian vetenskaplig-praktisk konferens av studenter, doktorander och unga forskare "Teknik och utrustning för kemisk, bioteknologisk och livsmedelsindustrin" (Biysk, 2009); All-Ryssland vetenskaplig-praktisk konferens "Baikalregionens vegetation och intilliggande territorier" (Ulan-Ude, 2011); V skolseminarium för unga forskare i Ryssland "Problem med hållbar utveckling av regionen" (Ulan-Ude, 2009); den regionala ungdomsvetenskapliga-praktiska konferensen med internationellt deltagande "Miljövänlig och resursbesparande teknik och material" (Ulan-Ude, 2010).
Arbetet utfördes som en del av forskningsprojekten: RFBR: Nr 08-04-90202-Monga "Studie av biogenetiska mönster av biosyntes av biologiska aktiva föreningar av endemiska växter i Centralasien" (2008-2009), nr 08-04-9803 7-rsibirya och
Den kemiska sammansättningen av växter som en indikator på tillståndet för ekosystemen i Baikalområdet "(2008-2010); tvärvetenskapligt integrationsprojekt №93 "Utveckling av forskning inom medicinsk kemi och farmakologi som vetenskaplig grund för utveckling av inhemska droger"; ett gemensamt projekt med vetenskapsakademin i Mongoliet "Att få nya lipo- och nanosomala former av droger med naturliga råvaror"; RFBR: № 10-03-16001-mobzros "Mobilitet för unga forskare" (2010), №11-03-90705-mobst vetenskapligt arbete (utbildning) av unga ryska forskare i ledande vetenskapliga organisationer i Ryska federationen 2011 (2011).
Publikationer. Enligt resultaten publicerades 17 vetenskapliga papper, varav 3 publicerades i tidskrifter som rekommenderades av Ryska federationens försvarsdepartementets högre beviskommission.
Till försvaret tas ut:
• resultaten av studien av den anatomiska strukturen, bestånden, äkthetskriterierna för Sivers och P., växande i Buryatia;
• Resultat av en kemisk studie av biologiskt aktiva ämnen och deras säsongsdynamik i ackumulering.
• Resultat av studier om standardisering av ovanstående del av Sivers p. Och s. Ett år.